肠道作为人体重要的消化与免疫器官,其内部栖息的微生物群落对人体健康起着关键作用。其中,拟杆菌和厚壁菌作为肠道优势菌群,在食物残渣分解代谢、维持肠道微生物动态平衡等方面意义重大。中医药在疾病治疗过程中,与肠道菌群平衡调节密切相关,参苓白术散作为经典健脾方剂,其含有的白术等药材成分,在调节肠道菌群方面备受关注。深入探究参苓白术散多糖对肠道菌群的作用机制,有助于揭示中医药治疗疾病的科学内涵,也为白术在中医药领域的应用提供新视角。
参苓白术散由多种中药材组成,其中白术是重要成分之一。《2025-2030年全球及中国白术行业市场现状调研及发展前景分析报告》指出,在2025年白术行业竞争激烈的背景下,白术质量对参苓白术散功效影响显著。实验选用从正规渠道购买的参苓白术散,其包含白扁豆 75g、茯苓 100g、莲子 50g、薏苡仁 50g、白术 100g 等多味药材。实验菌株选取多形拟杆菌、脆弱拟杆菌、厚壁菌 YT2、厚壁菌 T30 。同时,准备了厌氧菌 BHI 液体和固体培养基等多种试剂,以及 PCR 仪、厌氧工作站等专业仪器,为后续实验奠定基础。
采用水提醇沉法提取参苓白术散中的多糖,随后进行除蛋白、除色素及去除小分子物质等纯化处理,并测定多糖含量。分别配制 MM 培养基、BHI 培养基和参苓白术散多糖原溶液,将参苓白术散多糖原溶液加入 MM 培养基配制成 20% 的多糖溶液,每份培养基体积为 10ml,经高温高压灭菌(120℃,20min)处理。对厚壁菌和拟杆菌进行 DNA 提取,利用 16S rRNA 基因引物进行 PCR 扩增,扩增产物纯化测序后,在数据库比对鉴定细菌。将四种组合的混合菌(多形拟杆菌 + 厚壁菌 YT2、多形拟杆菌 + 厚壁菌 T30、脆弱拟杆菌 + 厚壁菌 YT2、脆弱拟杆菌 + 厚壁菌 T30)分别接种于 BHI 培养基和参苓白术散多糖培养基,初始接种量比例为 1∶1,在特定气体环境(H₂ 10%、N₂ 80%、CO₂ 10%)下培养,每间隔 4h 取样测定相关指标。通过梯度稀释和平板涂布等方法,实现细菌 OD₆₀₀与细菌数量的换算。
经鉴定,实验用厚壁菌 T30、厚壁菌 YT2、多形拟杆菌、脆弱拟杆菌与目的菌相似度均为 100%。通过革兰氏染色可清晰区分拟杆菌和厚壁菌,并计算其数量比。换算得出 1 OD₆₀₀多形拟杆菌有 49×10⁸个细菌,1 OD₆₀₀脆弱拟杆菌有 126×10⁸个细菌等。在不同组合的混合菌培养实验中,以参苓白术散多糖为碳源时,多形拟杆菌在与厚壁菌 YT2 或 T30 混合培养时,最大细菌生长数值分别在 48h 达到(9.50±0.37)×10⁸CFU/ml 和 32h 达到(11.81±0.29)×10⁸CFU/ml;脆弱拟杆菌在与厚壁菌 YT2 或 T30 混合培养时,最大细菌生长数值分别在 44h 达到(27.96±1.40)×10⁸CFU/ml 和 32h 达到(27.16±1.01)×10⁸CFU/ml,二株拟杆菌的生长速度及最大细菌浓度均高于厚壁菌 YT2 和厚壁菌 T30。
参苓白术散作为健脾名方,其功效与多糖成分调节菌群相关。实验表明,在参苓白术散多糖培养环境下,拟杆菌生长明显优于厚壁菌,这意味着白术等药材组成的参苓白术散中的多糖可作为竞争性碳源调节肠道菌群。此次研究虽通过体外混合菌竞争实验揭示了中药对微生态的部分影响,但对于相关细菌利用中药多糖碳源的分子机制仍不明确。在2025年白术行业竞争的大环境下,后续可结合更多前沿研究方法,进一步深入探究白术在参苓白术散中影响肠道微生态的作用机制,为白术在中医药领域的应用开拓更广阔的空间,也为中医药治疗疾病提供更坚实的理论依据。