中国报告大厅网讯，2026年，白蛋白行业技术持续向精准化、快速化、便捷化方向迭代，其中食品过敏原领域的白蛋白检测技术成为研究热点。卵白蛋白作为禽蛋清中的主要蛋白质，占蛋清总蛋白的54%，不仅是重要的食品功能性配料，更是主要的食品过敏原之一，其检测技术的优化对食品质量控制和过敏人群健康保障具有重要意义。目前，鱼糜制品中卵白蛋白的添加乱象及检测难题凸显，传统检测方法存在操作繁琐、依赖精密仪器等局限，因此开发高效便捷的白蛋白检测技术成为2026年白蛋白行业技术突破的重要方向。以下是2026年白蛋白行业技术分析。

  一、白蛋白的特性及鱼糜制品中白蛋白检测的必要性

  《2025-2030年全球及中国白蛋白行业市场现状调研及发展前景分析报告》指出，白蛋白家族中，卵白蛋白是一种球状磷酸糖蛋白，相对分子质量约45 ku，包含385个氨基酸残基，等电点约为pH 4.5，性质较为稳定。卵白蛋白分子中含有1个二硫键和4个自由巯基，经高温加热等处理后极易形成蛋白质间的交联，因而具有良好的凝胶性、乳化性和起泡性，作为一种功能性食品配料被广泛应用于食品工业中。但同时，卵白蛋白是蛋清中的主要过敏原之一，其致敏性仅次于卵类黏蛋白，可引起人体由IgE介导的Ⅰ型速发型变态反应，对婴幼儿和儿童致敏率较高，临床症状多表现为荨麻疹、呕吐、气喘等，严重可导致休克甚至死亡。此外，卵白蛋白的性质较稳定，即便经过高温等处理后依然具有致敏性，目前尚缺乏治疗卵白蛋白过敏的有效手段，防止卵白蛋白导致的食物过敏主要方法是避免摄入该蛋白，因此对非蛋类食品中卵白蛋白存在情况的检测至关重要。

  鱼糜制品因营养价值高、食用方便等特点成为我国鱼类加工的重要产品，其生产基本工艺是将鱼洗净去内脏后采肉去杂，鱼肉经漂洗、脱水后得到用于生产鱼糜制品的原料鱼浆，鱼浆经添加盐、淀粉等其他成分并擂溃，成型加热后成为鱼糜制品。随着鱼糜制品需求量持续增长，更多的低值鱼类被用于制备鱼糜原料，部分企业通过添加经脱盐处理的蛋清蛋白、大豆分离蛋白等外源蛋白来替代鱼肉成分以降低成本并提高鱼糜制品的凝胶特性和白度。这种行为不仅存在以低值蛋白替代高值鱼肉蛋白的问题，对于卵白蛋白等蛋白过敏的患者更存在安全隐患。我国国标中8类食品过敏原信息只是作为预包装食品标签的推荐标示内容，未对过敏蛋白的含量信息作具体要求，因此，开发高效的鱼糜中卵白蛋白检测技术，对鱼糜制品生产企业把控原料质量、避免以次充好、保障过敏人群健康具有重要意义和实际应用价值。

  二、现有白蛋白检测技术的局限及胶体金免疫层析技术的应用优势

  目前，应用于过敏原卵白蛋白的检测方法主要有免疫分析法、质谱法等。部分检测方法将一次性电化学微流控制装置与免疫磁珠结合，可检测微量卵白蛋白，灵敏度较高;还有方法采用ESI-MS技术鉴定卵白蛋白的特征肽以检测食物中的卵白蛋白，适合热处理食品中卵白蛋白的检测。但这些方法在实际应用中存在明显局限，检测步骤烦琐，需要高昂精密仪器，对操作人员技术水平要求高，检测周期长，无法实现现场快速检测，难以被用于鱼糜生产的实际检测中。

  胶体金免疫层析技术(CGIA)是以纳米金作为示踪标志物应用于抗原抗体的侧流免疫层析检测技术，该技术制作成本低、方便携带、便于现场快速检测且分析结果可肉眼辨别，被广泛应用于各个检测领域，在食品中过敏原白蛋白的快速检测中也展现出显著优势。已有研究基于双抗夹心胶体金免疫层析技术建立了检测甲壳类水产品中过敏原原肌球蛋白的方法，可在5 min内显示结果，视觉检测限为10.00 ng/mL;还有研究采用金和银纳米颗粒设置多色侧流免疫层析试纸，可同时检测卵白蛋白、酪蛋白和榛子敏蛋白3种过敏原，其中卵白蛋白的检测限为0.10 mg/L。相较于现有检测技术，胶体金免疫层析技术更适合鱼糜制品中卵白蛋白的现场快速检测，可有效解决鱼糜生产过程中白蛋白检测的痛点。

  三、基于胶体金免疫层析技术的白蛋白检测实验设计与实施

  3.1 白蛋白检测的实验材料与仪器准备

  实验所用材料包括新鲜鸡蛋、鸭蛋，鱼糜原料，DEAE-Sepharose树脂，四氯金酸，ECL化学发光试剂盒，硝酸纤维素膜(NC膜)、PVC底板、样品垫、结合垫、玻璃纤维棉、重悬工作液Base E(2×)、T线包被液，聚乙二醇8000、聚乙二醇20000，辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠IgG，以及其他常规分析纯试剂。实验仪器包括凝胶成像仪、划膜仪、自动切条机、真空冷冻干燥机、电热恒温培养箱、组织捣碎机、胶体金试纸分析仪、高速冷冻离心机等，所有仪器均经过校准，确保实验数据的准确性。

  3.2 卵白蛋白的纯化与鉴定

  蛋清前处理采用双水相萃取法并加以修改，将30 mL鸡蛋清用3倍体积的50 mmol/L NaCl溶液稀释，4 ℃下搅动2 h，用6 mol/L HCl调节pH至5.0，4 ℃静置0.5 h后于4 ℃、12000×g离心25 min，取上清液。边搅动上清液边加入聚乙二醇8000至饱和度达到9%(质量体积比)，静置0.5 h后，4 ℃、12000×g离心20 min，取上清液;再边搅动边加入聚乙二醇8000至饱和度达到15%(质量体积比)，静置0.5 h后，4 ℃、12000×g离心20 min，取上清液，用缓冲液(20 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5)充分透析。

  将已透析的样品上样于用缓冲液(20 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5)预平衡的DEAE-Sepharose离子交换层析柱(2.5 cm×20 cm)，用缓冲液流洗掉未结合蛋白，用含有0~0.2 mol/L NaCl的缓冲液进行线性洗脱，收集第3个洗脱峰即为纯化的目的蛋白卵白蛋白。采用SDS-PAGE对分离蛋白进行分析检测，将样品与上样缓冲液以1∶3(体积比)混合后，振荡混匀，95℃加热10 min，采用丙烯酰胺质量分数为12%分离胶和5%浓缩胶，电泳结束后，经考马斯亮蓝R-250显色、脱色后进行凝胶成像分析。将纯化的卵白蛋白进行SDS-PAGE后，染色、脱色后切胶回收目的蛋白条带，进行肽质量指纹图谱鉴定分析，结果显示共扫描得到195个肽段，含385个氨基酸残基，与鸡卵白蛋白氨基酸序列比对覆盖率为99%，证明获得了高纯度卵白蛋白。

  3.3 抗卵白蛋白多克隆抗体的制备与特异性验证

  取100 µL纯化的鸡卵白蛋白(2 mg/mL)与等体积的弗氏完全佐剂，充分乳化后，进行皮下多点注射ICR小鼠，每隔2周以相同剂量的抗原加强免疫。免疫4次后，采血，静置待血清析出后，3000×g离心10 min，将血清用Protein G亲和层析柱纯化，获得抗卵白蛋白多克隆抗体IgG。

  通过半干转膜方式将蛋白从聚丙烯酰胺凝胶转移到NC膜上，用含5%脱脂奶的TBST缓冲液(含0.5%吐温-20的20 mmol/L Tris-HCl，pH 8.0)室温封闭1 h，用TBST洗膜3次，每次5 min。将鼠抗鸡卵白蛋白多克隆抗体与TBST按1∶10000(体积比)稀释后室温孵育NC膜1 h，TBST洗膜5次，每次5 min;再以HRP标记的羊抗鼠IgG与TBST按1∶20000(体积比)稀释后室温孵育1 h，TBST洗膜5次，每次5 min。加入ECL显色液至NC膜，室温避光孵育3 min，在荧光化学发光成像系统上记录结果。结果显示，制备的抗卵白蛋白多克隆抗体对鸡、鸭蛋清中的卵白蛋白均有特异性反应，与蛋清中的其他蛋白及草鱼、鲢、蓝圆鲹等鱼肉肌肉蛋白和凡纳滨对虾肌肉蛋白不产生免疫交叉反应，特异性良好，可用于后续白蛋白检测实验。

  3.4 胶体金溶液与金标抗体的制备

  胶体金溶液采用柠檬酸还原法制备，取100 mL配制好的0.01%氯金酸溶液搅动加热至沸腾，吸取1 mL 1%柠檬酸三钠溶液快速加入，持续沸腾10 min后，停止加热并冷却至室温。通过目测和紫外-可见分光光度计分析验证胶体金溶液质量，目测显示胶体金溶液清澈透亮，呈酒红色，无悬浮物和沉淀;紫外-可见分光光度计分析显示，500~550 nm为其特征峰，最大吸收波长在527 nm，对应的最大吸光值为3.49，峰形较窄、波形光滑，表明胶体金溶液质量良好。

  金标抗体的制备过程中，取1 mL胶体金溶液，采用氯化钠破坏法确定最佳pH和最适抗体添加量。由于胶体金溶液易损坏pH计探头，采用不同添加量的0.2 mol/L K₂CO₃来调节pH，结果显示，1 mL胶体金-抗体耦合物溶液的OD₅₂₀值随着0.2 mol/L K₂CO₃的增加不断增大，当0.2 mol/L K₂CO₃添加量为10 µL时，OD₅₂₀达到最大值，此后变化幅度不大，因此选择1 mL胶体金溶液中0.2 mol/L K₂CO₃的最适添加量为10 µL。关于最适抗体添加量，随着抗体添加量的增加，胶体金-抗体耦合物OD₅₂₀值逐渐增大，当每毫升胶体金溶液中抗体浓度为0.075 mg/mL时，OD₅₂₀为最大值，之后随着抗体添加量继续增大，OD₅₂₀的值未出现显著升高，表明体系达到稳定状态，此时即为胶体金溶液中鼠抗鸡蛋卵白蛋白多克隆抗体的最适浓度。

  将标记完成的金标抗体溶液采用两步法离心，所得的沉淀混合均匀后复溶，加入500 µL重悬工作液Base E(2×)，加水补足至1 mL，均匀平铺在空白玻璃纤维上，冷冻真空干燥2 h后取出密封即为金标垫。

  3.5 卵白蛋白胶体金免疫层析试纸条的制备与优化

  将NC膜平滑地贴在PVC底板中间位置上，用划膜仪划线。根据标尺位置分别将浓度为0.8 mg/mL的抗原卵白蛋白和浓度为1 mg/mL的羊抗鼠IgG划至NC膜上的T线和C线处，37 ℃干燥至少4 h，取出密封干燥备用。免疫层析条件主要优化检测线T和质控线C的最佳工作质量浓度以及最适NC膜。按顺序将金标垫、样品垫和吸水纸贴在底板上，用切条机切割成宽3.5 mm的试纸条，密封保存备用，即得到卵白蛋白胶体金免疫层析检测试纸(OVA-CGIA-Strip)。

  四、白蛋白检测试纸条的性能测试结果

  4.1 白蛋白检测试纸条的灵敏度测试

  配制终浓度为0、0.01、0.10、1.00、10.00、20.00、40.00、100.00 µg/mL的卵白蛋白标准工作液，用OVA-CGIA-Strip检测，各取50 µL不同浓度的工作液滴加到样品垫上，反应5 min后观察显色结果。结果判定方法：阴性，T、C线均显色;阳性，C线显色，T线不显色;无效，T线、C线均不显色。依靠胶体金试纸分析仪读取T线数值，以T线条带的光吸收值为纵坐标，各卵白蛋白浓度的对数值为横坐标，每个浓度样本平行测得3次，利用Origin 2021软件拟合线性标准曲线。

  结果显示，当卵白蛋白的浓度为0.01~20.00 µg/mL时，卵白蛋白浓度的对数值与T线灰度值呈线性关系，线性方程为y=7.17-2.79lgx，R²=0.98，检出限(LOD)=0.20 µg/mL，作为抑制性ELISA，其IC₅₀=(3.13±0.18)µg/mL。随着卵白蛋白反应浓度的增大，OVA-CGIA-Strip的T线颜色逐渐变浅，C线颜色保持不变;当卵白蛋白浓度为1.00 µg/mL时，T线仍略有颜色;浓度为20.00 µg/mL时，T线完全消失，因此视觉检出限(vLOD)为20.00 µg/mL，表明该试纸条对白蛋白的检测灵敏度良好，可满足鱼糜中卵白蛋白的检测需求。

  4.2 白蛋白检测试纸条的特异性测试

  选取5种常见鱼糜制品的原料鱼肉：草鱼、鲢、蓝圆鲹、尼罗罗非鱼和大西洋鳕，参考相关方法取鱼肌肉，用冰水漂洗2~3次，擦干鱼肉表面水分后切碎，加盐擂溃后简单制成鱼糜。鱼糜与样品提取缓冲液按1∶10(质量体积比)充分溶解混匀，静置5 min后吸取上清液50 µL进行检测，同时以鸡蛋卵白蛋白和鸭蛋卵白蛋白作为阳性对照，静置5 min显色后观察结果。

  结果显示，5种鱼糜的测试结果均为阴性，而对照组鸡蛋卵白蛋白、鸭蛋卵白蛋白均呈阳性，表明所研发的OVA-CGIA-Strip与鱼肉蛋白不发生免疫交叉反应，与Western blot结果一致，特异性良好，可准确区分鱼糜中的白蛋白与其他鱼肉蛋白，避免检测干扰。

  4.3 白蛋白检测试纸条的准确性测试

  选取2份不含蛋清的阴性鱼糜样品，向其中分别添加不同浓度的鸡蛋卵白蛋白和鸭蛋卵白蛋白，使加标后卵白蛋白终浓度分别为1.00、10.00和100.00 µg/mL，每个浓度设置3组平行，鱼糜与样品提取缓冲液按1∶10(质量体积比)充分溶解混匀，静置5 min后吸取上清液50 µL分别测定，并用胶体金试纸分析仪进一步确证。加标回收率和变异系数(CV)计算公式如下：

  加标回收率(%)=(实际检测值/加标量)×100%

  CV(%)=(SD/Mean)×100%

  测试结果显示，鸡蛋卵白蛋白在鱼糜样品中的加标回收率为109.50%~112.52%，CV值为9.83%~11.32%;鸭蛋卵白蛋白在鱼糜样品中的加标回收率为87.94%~114.92%，CV值为11.03%~12.41%。由于鱼糜的基质干扰较大，导致两种卵白蛋白在鱼糜中的加标回收率整体略偏高，但该方法在线性范围内的加标回收结果符合预期要求，具有良好的准确度，表明研发的OVA-CGIA-Strip可用于鱼糜中白蛋白的精准检测。

  4.4 白蛋白检测试纸条的实际应用效果

  随机选取7种市售鱼糜和1份不含蛋清的鱼糜样品作为阴性对照样本，鱼糜与样品提取缓冲液按1∶10(质量体积比)充分溶解，静置5 min后取上清液进行10~100倍稀释处理，保证最终检测浓度处于检测线性范围内，滴加50 µL溶液于样品垫上进行检测，5 min后观察条带显色情况，并通过胶体金试纸分析仪读取T线数值，代入标准曲线中推测出鱼糜样品中卵白蛋白的含量。

  结果显示，7种冷冻鱼糜制品在检测卡的T线均出现不同程度的弱化，表明不同鱼糜制品中均有不同程度添加蛋清，这也提示了在鱼糜制品包装上对蛋清含量进行明确标示及监管的必要性。为进一步确认这7种鱼糜制品中卵白蛋白的存在情况，用Western blot作进一步验证，结果显示，7种鱼糜制品均在分子质量45 ku处有卵白蛋白特异性条带显示，而阴性对照未检测到该条带，此结果与检测试纸条一致，表明该试纸条可有效应用于实际鱼糜样品中的白蛋白检测。

  五、全文总结

  本文围绕2026年白蛋白行业技术发展热点，聚焦鱼糜中卵白蛋白的快速检测需求，开发了基于胶体金免疫层析技术的卵白蛋白检测方法，通过实验制备并优化了卵白蛋白胶体金免疫层析检测试纸条，系统完成了试纸条的性能测试及实际应用验证。实验结果表明，该检测方法所用的卵白蛋白经纯化后纯度达99%，制备的抗卵白蛋白多克隆抗体特异性良好，胶体金溶液质量达标，优化后的检测试纸条线性范围为0.01~20.00 µg/mL，检出限为0.20 µg/mL，IC₅₀=(3.13±0.18)µg/mL，视觉检出限为20.00 µg/mL，特异性强、准确度高，鸡蛋卵白蛋白和鸭蛋卵白蛋白的加标回收率分别为109.50%~112.52%和87.94%~114.92%，可有效检测鱼糜中的卵白蛋白。该检测方法操作简便、耗时短，从样品处理到检测完成整个过程可在10 min内实现，无需专业操作人员，配合胶体金试纸分析仪可实现白蛋白的定量检测，相较于传统检测方法具有显著优势，解决了鱼糜生产过程中白蛋白检测不便的痛点。该研究不仅完善了2026年白蛋白行业检测技术体系，更为鱼糜制品生产企业把控原料质量、保障过敏人群健康提供了可靠的技术支撑，未来可通过优化抗体类型、改进试纸条性能，进一步拓展该技术在其他复杂食品基质中白蛋白检测的应用范围。